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BLU新視野 | Jurkat細(xì)胞精準(zhǔn)計數(shù)為何屢成瓶頸?

點擊次數(shù):308 更新時間:2025-08-22
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Jurkat細(xì)胞是人急性T淋巴細(xì)胞白血病(T-ALL)來源的懸浮細(xì)胞系,1970年代由Schneider建立。因保留了完整的T細(xì)胞受體(TCR)-CD3復(fù)合體及下游信號分子,它成為全球研究T細(xì)胞活化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞因子分泌以及病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的“黃金模型"。


Jurkat細(xì)胞直徑約14–16 μm,呈懸浮生長,極易自發(fā)或剪切誘導(dǎo),聚集成團;活細(xì)胞邊緣折光性強,死細(xì)胞則迅速皺縮,臺盼藍(lán)染色顯示為一深一淺,肉眼判斷的主觀誤差較大,計數(shù)重復(fù)性低。此外,其核型復(fù)雜(假三倍體),在長期傳代中可能出現(xiàn)亞克隆漂移,因此實驗前需同步檢定細(xì)胞活率、濃度及關(guān)鍵表面標(biāo)記(如CD3、CD28)。


對于Jurkat細(xì)胞的精準(zhǔn)計數(shù)一直是個難題。傳統(tǒng)技術(shù)方法如血球計數(shù)板,只能選取部分視野,且人眼計數(shù)有限,因此,手動計數(shù)的誤差通常>15%,這對后續(xù)實驗的結(jié)果以及實驗整體的可重復(fù)性都帶來了極大的影響。


為了應(yīng)對這一計數(shù)難題,我們使用了Beckman Coulter Vi-CELL BLU細(xì)胞活率分析儀,調(diào)整并測試了Jurkat細(xì)胞計數(shù)的最佳參數(shù),快速得到了較為精準(zhǔn),可重復(fù)的計數(shù)結(jié)果。


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實 驗

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在使用Beckman Coulter Vi-CELL BLU細(xì)胞活率分析儀時,大多數(shù)細(xì)胞可以使用默認(rèn)的儀器設(shè)置進(jìn)行分析。在某些情況下,某些細(xì)胞系可能需要修改這些分析參數(shù)。Vi-CELL BLU自帶的軟件允許用戶直觀且輕松地選擇最佳的儀器設(shè)置,從而確保準(zhǔn)確的結(jié)果。用于Jurkat細(xì)胞分析的儀器設(shè)置如下(圖1)。


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圖1:用于Jurkat細(xì)胞計數(shù)時,Beckman Coulter Vi-CELL BLU細(xì)胞活率分析儀的參數(shù)設(shè)置


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結(jié) 果

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Vi-CELL BLU細(xì)胞活率分析儀報告的結(jié)果如圖2所示。細(xì)胞活率百分比和總Jurkat細(xì)胞濃度分別為91.5%和8.99 x 10^6 cells/mL。Vi-CELL BLU細(xì)胞活率分析儀還報告活細(xì)胞濃度、平均細(xì)胞直徑、大小分布和平均細(xì)胞圓形度。每次測量技術(shù)的細(xì)胞圖像也可以存檔,以供將來重新分析。


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圖2:活細(xì)胞用綠色圓圈表示,非活細(xì)胞用紅色圓圈表示


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結(jié) 論

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對于高密度、易聚團或形態(tài)不均一的懸浮細(xì)胞系,Beckman Coulter Vi-CELL BLU細(xì)胞活率分析儀能夠消除人為偏差,提升數(shù)據(jù)一致性并消除手動計數(shù)中固有的主觀性,并且拍照多個視野,與手動計數(shù)相比,有≥10?的樣本量來降低統(tǒng)計誤差。此外,每次計數(shù)的結(jié)果都會輸出可追溯圖像,滿足GLP要求。


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下載產(chǎn)品資料:

掃描下方二維碼即可下載:細(xì)胞計數(shù)和活力分析系統(tǒng)Vi-CELL BLU,全自動標(biāo)準(zhǔn)化測量、Jurkat Cell Analyses Using the Vi-CELL BLU CellViability Analyzer!


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細(xì)胞計數(shù)和活力分析系統(tǒng)Vi-CELL BLU,全自動標(biāo)準(zhǔn)化測量、Jurkat Cell Analyses Using the Vi-CELL BLU CellViability Analyzer


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